科研 小鼠彈性蛋白(ELN)檢測試劑盒
| 反應種屬 | 小鼠 |
| 檢測范圍 | 3.125ng/mL-100ng/mL |
| 物理性能 | 試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。 |
| 用途 | 定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液等樣本中小鼠彈性蛋白(ELN)的濃度。 |
| 實驗原理 | 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被抗小鼠彈性蛋白(ELN)抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入小鼠彈性蛋白(ELN)校準品和待測樣本，再加入另一株HRP標記的抗小鼠彈性蛋白(ELN)抗體（酶標抗體），經過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標抗體的夾心復合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產生藍色產物，在終止液（2M硫酸）作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀450nm波長上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中小鼠彈性蛋白(ELN)的濃度正相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中小鼠彈性蛋白(ELN)的濃度。 |
| 特異性 | 本試劑盒識別天然和重組小鼠彈性蛋白(ELN)，與結構類似物無交叉。 |
| 重復性 | 板內變異系數均<10%，板間變異系數均<15%。 |
| 回收率 | 回收率在 85%-115%之間。 |
| 試驗所需自備試驗器材 | 1、酶標儀（450nm）2、精密移液器及一次性吸頭3、蒸餾水4、洗瓶或者自動洗板機5、37℃水浴鍋或恒溫箱6、500ml 量筒 |
| 操作程序 | 所有試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質控品和樣品，建議做復孔。 1、按前面說明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。 2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。 3、設置標準品孔、0值孔、空白孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，0值孔加樣本稀釋液50μL，空白孔不加；血清/血漿：樣本孔中加入待測樣本 10 μL+40μL樣本稀釋液（相當于稀釋5倍，根據情況可改變稀釋倍數）；其他類型樣本：樣本孔中加入待測樣本 50 μL（建議做預實驗） 4、除空白孔外，標準品孔、0值孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL。 5、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育60min。 6、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20S，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復5次。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。 7、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育15min。 8、所有孔加入終止液50μL，在酶標儀450nm波長上讀取各孔吸光度（OD值）。 |
| 注意事項 | 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請確保上一次使用之后沒有被污染。2：酶標板單次未使用完，要謹記密封放到 2-8℃保存。 |
| 問題分析 | ①問題描述：標準曲線差可能原因及相應對策：1.試劑盒平衡時間不夠——不低于 2 個小時的室溫平衡2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌3.移液不精確——檢查和校正移液器②問題描述：精密度低可能原因及相應對策：1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑3.重復利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模4.加樣不精確——檢查和校正移液器③問題描述：O.D值低可能原因及相應對策：1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑2.溫育時間不正確——保證充足的溫育時間3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度4.酶標記物或底物失效——通過混合酶標記物和底物，顏色迅速顯現來檢查5.沒有加入終止液——按照說明書實驗操作步驟加入終止液6.超出讀數時間讀數——在說明書推薦的讀數時間內讀數④問題描述：樣本值可能原因及相應對策：1.不正確的樣本儲存方式——正確儲存樣本，使用新鮮樣本進行實驗2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法3.待測物質在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復實驗 |
| 聲明 | 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對因此產生的問題負責，亦不承擔任何法律責任。 |
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